NRPB41 Streptavidin NUPharose FF

发布日期：2024-06-04 阅读次数：152

1 、产品介绍

Streptavidin NUPharoseFF 是将链霉亲和素（Streptavidin）和纽龙生物 NUPharose 琼脂糖凝胶偶联而成的生物亲和层析分离介质。该填料基于链霉亲和素与生物素的特异性结合实现从生物样品或混合物中分离纯化生物素或生物素化的抗原、抗体、核酸等物质，使用场景主要有以下三类：

l 直接纯化或富集生物素化的生物分子，链霉亲和素与生物素的结合力非常强，一般需要变性条件下才能将其分离，此时样品或配基易失活。

l 纯化抗原或抗体。将生物素化的抗体结合在填料上，利用抗原抗体的亲和特性纯化无生物素化的抗原，抗原洗脱时抗体不会被洗脱。反之亦可。

l 纯化 2-亚氨基生物素（2-iminobiotin）标记的生物分子。链霉亲和素与 2-亚氨基生物素的结合相对生物素较弱，在 pH 9.5~11.0 条件下结合，在 pH=4.0 的非变性条件下洗脱，不影响样品的活性和凝胶的活性。

2 、产品特点与技术指标

产品名称	Streptavidin NUPharose FF
目录编号	NRPB41L 、NRPB41S（预装柱）
基质	4%交联琼脂糖
配基	链霉亲和素，~6mg/mL
粒径范围 a	45~165 μm
平均粒径	~90 μm
载量	≥6mg/mL（生物素化 BSA）b
推荐工作流速	~150 cm/h（平衡与洗脱），15~100 cm/h（结合）
最大流速与压力 d	>900 cm/h
使用 pH	2~10.5（推荐的工作 pH）
储存与运输	20%乙醇，2~8 ℃保存，2~30 ℃运输
保质期	3 年

注：a90%体积以上的微球在此粒径范围；bDBC10%测试条件为：D-生物素标记 BSA ，10%流穿，

6 min 停留时间；d 10 cm 柱高下的最大测试流速。

3 、链霉亲和素填料应用原理简介

如上所述，Streptavidin NUPharose FF 填料是在 NUPharose 琼脂糖凝胶微球骨架上修饰链霉亲和素而成（图 1a）。链霉亲和素是同一亚基组成的四聚体蛋白，可特异性结合 D-生物素以及 D-生物素标记物质（图 1b，c）。链霉亲和素与 D-生物素之间的亲和力非常高，其解离常数在 10−14 mol/L 数量级，是自然界最强的非共价相互作用之一。因而 Streptavidin NUPharoseFF 填料与生物素标记物质结合后，需要在变性条件下洗脱。在该使用方式下，样品易失活，填料的性能也受影响。

得益于链霉亲和素配基与 D-生物素之间的高亲和力，结合在 Streptavidin NUPharose FF 填料上的生物素标记抗体可以捕获相应的抗原物质（图2），抗体-抗原复合物可以在 pH=3 左右的酸性条件下解离，从而得到纯化的抗原物质，填料可以重复使用多次。另外，如果是生物素标记的抗原物质与填料结合，则可以用来富集和纯化相应的抗体。

亚氨基生物素是一种生物素类似物，亚氨基生物素与链霉亲和素之间的结合有着 pH 依赖性。在碱性条件下，亚氨基生物素与链霉亲和素的解离常数在 10−11 mol/L 数量级，尽管比 D-生物素与链霉亲和素的解离常数高 2~3 个数量级，亚氨基生物素与链霉亲和素的亲和力仍非常高，在 pH 9~11 条件下，Streptavidin NUPharose FF 可结合亚氨基生物素标记物质；在 pH 3~4 的酸性条件下，亚氨基生物素被质子化，亚氨基生物素与链霉亲和素的解离常数在 10−3 mol/L 数量级，即链霉亲和素与亚氨基生物素之间的结合可在 pH=4 的酸性条件下解离，因而 Streptavidin NUPharose FF 填料在纯化亚氨基生物素标记物质时，可在温和的条件下洗脱（图 3）。

4 、使用方法参考

4.1 色谱柱装填

以下阐述与层析系统连接时，填料的色谱柱装填方法。

（1）所有需要用到的材料的温度要与色谱操作的温度一样，液体最好做脱气处理。

（2）填料用量计算：通过沉降定量填料体积，需要的沉降填料体积=柱体积×压缩比（也称压缩因子）。沉降体积是指填料在 20%乙醇保存液中自然沉降完全读取的稳定体积。Streptavidin NUPharoseFF 的压缩比为 1.15。为使达到装柱比，可通过柱头下压的方法，也可以通过高流速压柱。

（3）填料清洗：将填料悬液充分摇匀后量取相应体积，抽滤除去液体，并用约 3 倍填料体积的纯化水洗涤，重复 3 次，以除去保存液。

（4）装柱填料悬液准备：将填料转移到适当的容器中，加入适量的装柱液，制成 50~75 v%的装柱填料悬液，使用前搅匀。

（5）装填前准备：在清洗干净的层析柱下端加入装柱液，以除去下垫片及层析柱下端的空气，在柱内保留少量的蒸馏水，拧紧下堵头，调整柱子使其垂直于地面。

（6）装填：将搅匀后的填料悬液一次性缓慢倒入层析柱内（必要时使用装柱器），为避免引入气泡，应使之沿层析柱内壁自然流下。将所有填料加入后，用装柱液将装柱器加满，拧紧装柱器上盖，将柱子与层析系统连接。

（7）压柱：使柱内填料自然沉降（或 50~150 cm/h 的低流速下沉降），待填料沉降完全后（填料与液体的界面清晰），去除装柱器，装上上柱头，并将柱头下降至界面处；通过高流速（推荐流速见下表，注意柱压不超过 0.3 MPa），继续压柱至界面清晰稳定，标记界面稳定时的柱高。停泵，打开柱头上的阀门/堵头，关闭柱底的阀门/堵头，下压柱头至标记位置下方与压缩比对应的位置，旋紧柱头，装柱完成。装柱完成后，需用高流速平衡柱内的填料。